Parvovirus Suino PPV

INTRODUÇÃO
O parvovírus suíno (PPV) é reconhecido como agente causador de problemas reprodutivos em fêmeas suínas (3, 7, 8). Trabalhos recentes realizados no Brasil comprovam que este vírus ainda é uma das principais causas infecciosas de abortamento e mumificação fetal em granjas tecnificadas (10, 14). A forma mais comum de transmissão do vírus é pelo contato oronasal, através de fezes ou restos fetais (9). Os problemas reprodutivos ocorrem quando fêmeas com ausência ou baixos títulos de anticorpos, principalmente leitoas, infectam-se durante a gestação. Como o PPV apresenta tropismo por células em replicação, o feto e os envoltórios fetais são freqüentemente atingidos. Conforme a literatura, a infecção é geralmente restrita a fêmea primípara e a carga viral concentra-se nas baias de reprodução (9, 11), havendo poucos relatos do vírus em outras fases de produção. Ao comparar a presença de PPV e de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) em órgãos linfóides de leitões refugos, a incidência de PPV foi maior do que a de PCV2, observando positividade inclusive em amostras negativas para PCV2 (5). A importância da circulação viral nesta categoria decorre de ser uma possível fonte de infecção para a classe mais suscetível do plantel, a leitoa. O presente trabalho teve como objetivo detectar a presença de PPV em leitões refugos de diferentes empresas, a fim de avaliar a ocorrência do vírus nesta categoria.

MATERIAL E MÉTODOS
As amostras de sangue foram coletadas de leitões refugos, por diversas causas, entre 30 e 60 dias de idade, pertencentes a três empresas (A, B, C), situadas na Região Sul do Brasil. No total, foram coletadas 132 amostras em onze municípios distribuídos: Empresa A- 43 amostras em um município (a); Empresa B- 43 amostras em seis municípios (b, c, d, e, f, g); e Empresa C- 46 amostras em quatro municípios (h, i, j, k). Após a coleta por punção na veia jugular, o sangue foi dessorado e o soro enviado ao Laboratório de Virologia (UFRGS) para análise. A extração do DNA total foi realizada através um protocolo a base de sílica (2). A detecção de parvovírus suíno do material extraído foi realizada conforme Nested-PCR previamente descrita, utilizando iniciadores específicos para o gene da proteína não estrutural – NS1 (12). A seguir, foi realizada a eletroforese em gel de agarose 2% com 0,1 μg/mL de Blue Green I (LGC) em tampão de TAE uma vez concentrado (0,04 M Tris-Acetato, 0,001 M EDTA pH 8,0). A visualização foi feita sob lâmpada ultravioleta, com padrões de peso molecular com escala de 100 pb (Fermentas, EUA). Foram utilizados controles positivo (cepa de PPV gentilmente cedida pela Embrapa Suínos e Aves - CNPSA) e negativo (água destilada) em todas as reações.

RESULTADOS E DISCUSSÃO
Os resultados estão descritos na Tabela 1. O DNA de PPV foi detectado em 23 amostras, que geraram um produto de 137 pb (pares de bases). Não foi evidenciada presença de falso-positivos nos controles negativos. A ocorrência de PPV foi de 6 (13,95%), 7 (16,28%) e 10 (21,74%) para as empresas A, B e C, respectivamente. A média de leitões refugos positivos para PPV das três empresas foi 17,32%. São raros os trabalhos que relatam a detecção direta de PPV em leitões de creche ou terminação. A sugestão de neonatos com infecção persistente (PI) poderia ser uma explicação para a manutenção do vírus no plantel (11), porém a presença de animais PI é um evento extremamente raro. Outra possibilidade seria a presença do PPV facilitada por agentes imunodepressores, como o PCV2. Em trabalhos experimentais, foi observado que a Síndrome da Refugagem Multissistêmica do Suíno (SRMS) realmente pode facilitar a infecção do PPV em leitões (1, 6). Entretanto, em estudo realizado com leitões com e sem sintomatologia da SRMS, foi observado que a detecção do PPV possui baixa relação com a presença do PCV2 (4). Quando a patogenia da infecção pelo PPV foi descrita, na década de 70, a presença do vírus em outras categorias não foi evidenciada, possivelmente devido à baixa sensibilidade das técnicas até então utilizadas. A PCR consegue obter boa sensibilidade e especificidade, resultando em um diagnóstico até 178 vezes mais sensível do que a técnica de isolamento viral e 3200 vezes mais sensível que a técnica de hemaglutinação, que é a prova padrão de detecção do PPV (13). A detecção do PPV através de Nested-PCR é, tradicionalmente, realizada em fetos ou tecidos linfáticos de animais doentes. Assim, a utilização do soro como material para a detecção do agente viral, além de prático, pode ser uma ferramenta importante para compreender a circulação viral em diferentes categorias na criação de suínos, que até então eram desconsideradas.

CONCLUSÃO
O presente trabalho observou elevada ocorrência de PPV em animais refugos na fase de creche. A utilização do soro para diagnóstico do agente viral mostrou-se adequada para novos estudos sobre a disseminação viral.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. ALLAN, G.M.; KENNEDY, S.; McNEILLY, F.; FOSTER, J.C.; ELLIS, J.A.; KRAKOWKA, S.J.; MEEHAN, B.M.; ADAIR, B.M. Experimental reproduction of severe wasting disease by co-infection of pigs with porcine circovirus and porcine parvovirus. Journal of Comparative Pathology, v.121, p.1-11, 1999.

2. BOOM, R.; SOL, C.J.A.; SALIMANS, M.M.M.; JANSEN, C.L.; WERTHEIM-VAN DILLEN, P.M.E.; VAN DER NOORDAA, J. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. Journal of Clinical Microbiology, v.28, n.3, p.495-503, 1990.

3. CARTWRIGHT, S.F.; HUCK, R.A. Viruses isolated in association with herd infertility, abortions and still-births in pigs. Veterinary Record, v.81, p.196-197, 1967.

4. GAVA, D.; STRECK, A.F.; SOUZA, C.K.; GONÇALVES, K.R.; RODRIGUES, E.E.G.; BARCELLOS, D.E.S.N.; BORTOLOZZO, F.P.; WENTZ, I.; CANAL, C.W. Detection of PPV and PCV2 in serum samples from piglets with different levels of PCV2 challenge. In: 20th INTERNATIONAL PIG VETERINARY SOCIETY CONGRESS. Proceedings… Durban, África do Sul, 2008, p.60.

5. GONÇALVES, K.R.; SOUZA, C.K.; STRECK, A.F.; ALMEIDA, L.L.; RODENBUSCH, C.; MACAGNAN, M.; RAVAZZOLO, A.P.; CANAL, C.W. Estudo da ocorrência de parvovírus suíno e correlação com circovírus suíno tipo 2 em leitões refugos. In: XIX SALÃO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA UFRGS. Livro de Resumos. Porto Alegre, 2007, p.214.

6. KENNEDY, S.; MOFFETT, D.; McNEILLY, F.; MEEHAN, B.; ELLIS, J.; KRAKOWKA, S.; ALLAN, G.M. Reproduction of lesions of postweaning multisystemic wasting syndrome by infection of conventional pigs with porcine circovirus type 2 alone or in combination with porcine parvovirus. Journal of Comparative Pathology, v.122, p.9-24, 2000.

7. MENGELING, W.L.; CUTLIP, R.C.; WILSON, R.A.; PARKS, J.B.; MARSHALL, R.F. Fetal mummification associated with porcine parvovirus infection. Journal of American Veterinary Medical Association, v.166, p.993-995, 1975.

8. MENGELING, W.L.; LAGER, K.M.; VORWALD, A.C. The effect of porcine parvovirus and porcine respiratory and reproductive syndrome virus on porcine reproductive performance. Animal Reproduction Science, v 60, p.199-210, 2000.

9. MORAES, M.P.; COSTA, P.R.S. Parvoviridae. In: FLORES, E. (ORG.). Virologia Veterinária. Santa Maria: UFSM. 2007. p.275-296.

10. MORENO, A.M.; PAIXÃO, R.; OLIVEIRA Jr, F.T.T.; GOBI, D.D.; NOVITA, S.M.; COUTINHO, T.A.; BACCARO, M.R. Agentes causadores de mumificação fetal, natimortalidade e abortamento em suínos no Brasil. In: 13º CONGRESSO DA ABRAVES. Anais... Florianópolis, 2007, p.249-252.

11. ROEHE, P.; SOBESTIANSKY, J.; BARCELLOS, D. Parvovirose. In: SOBESTIANSKY, J. & BARCELLOS, D. (ORG.). Doença dos Suínos. Goiânia: Cânone editorial. 2007. p.286-293.

12. SOARES, R.M.; DURIGON, E.L.; BERSANO, J.G.; RICHTZENHAIN, L.J. Detection of porcine parvovirus DNA by the polymerase chain reaction assay using primers to the highly conserved nonstructural protein gene, NS-1. Journal of Virological Methods, v.78, p.191-198, 1999.

13. 43 SOUZA, C.K.; GONÇALVES, K.R.; STRECK, A.F.; ALMEIDA, L.L.; CANAL. C.W. Determinação da especificidade e sensibilidade de uma nested-PCR para a detecção do parvovírus suíno. In: XIX SALÃO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA UFRGS. Livro de Resumos. Porto Alegre, 2007, p.213.

14. WOLF, V.H.G.; MENOSSI, M.; MOURÃO, G.B.; GATTI, M.S.V. Molecular basis for porcine parvovirus detection in dead fetuses. Genetics and Molecular Research, v.7, p.509-517, 2008.

Tabela 1. Amostras positivas através de Nested-PCR, de acordo com a Empresa e a sua localização (município). Entre parêntesis está o número de amostras coletadas em cada município.

Empresa Município
a b c d e f g h i j k
A (n=43) 6 (43)
B (n=43) 0 (8) 2 (7) 1 (8) 1 (6) 1 (6) 2 (8)
C (n=46) 3 (16) 1 (10) 6 (10) 0 (10)