INFLUÊNCIA DA FREQUÊNCIA DE AGITAÇÃO NA QUALIDADE DE DOSES DE SÊMEN SUÍNO EM DIFERENTES DILUENTES DE CONSERVAÇÃO

 

A inseminação artificial em fêmeas suínas caracteriza-se pela utilização de doses inseminantes (DI) resfriadas e mantidas a 15-18°C (JOHNSON et al., 2000) durante três a dez dias, dependendo do diluente utilizado. A elaboração de padrões de qualidade para o processamento e armazenamento das DI é primordial, uma vez que estão diretamente relacionados com a fertilidade e desempenho reprodutivo do plantel. A sedimentação das células espermáticas durante o armazenamento é um dos fatores que influencia a função espermática, uma vez que parece alterar a disponibilidade de diluente para alguns espermatozoides e comprometer a sobrevivência dos mesmos (BELSTRA, 2007). Entretanto, os trabalhos que avaliaram a influência da homogeneização de DI na qualidade espermática durante o armazenamento apresentam resultados controversos (RODRÍGUEZ GIL & RIGAU, 1995; SIMMET et al., 1998; SCHULZE et al., 2015). O presente experimento teve como objetivo verificar o efeito de duas técnicas para a agitação de doses de sêmen e de dois diluentes de conservação na qualidade espermática ao longo do período de armazenamento.

 

Foram utilizadas DI provenientes de sete reprodutores suínos. As DI foram produzidas em split sample em diluente BTS (Beltsville Thawing Solution, Minitüb GmbH) e Androstar® Plus (Minitüb GmbH) com aproximadamente 1,5 bilhão de espermatozoides em 45 ml de volume total e envasadas em flexitubos (Flexitubes®, Minitüb GmbH). As DI foram armazenadas durante sete dias à temperatura média de 17,8°C ± 0,49 e, durante o armazenamento, foram submetidas às seguintes formas de homogeneização: MANUAL, com homogeneização manual das doses uma vez ao dia; e AUTO, com agitação mecânica e automatizada das doses quatro vezes por dia, durante dois minutos. A agitação mecânica das doses foi realizada em uma conservadora com movimentação automatizada (Equittec®) específica para essa finalidade. Para o sêmen in natura foram realizadas análises de motilidade, concentração e morfologia espermáticas. Para as DI foram feitas avaliações de motilidade e concentração nas horas 24, 72 e 168, e de defeitos de acrossoma nas horas 72 e 168. Os parâmetros de motilidade e cinética espermática foram avaliados em sistema computadorizado de análise espermática (CASA, AndroVision®, Minitüb GmbH). A morfologia e integridade de acrossoma foram avaliadas por preparação úmida entre lâmina e lamínula sob microscopia de contraste de fase (1000x), sendo classificadas 200 células espermáticas. A análise estatística foi realizada usando o PROC GIMMIX do SAS (SAS 9.3, 2011). As variáveis foram analisadas como medidas repetidas, em modelo com efeitos fixos da frequência de homogeneização, do diluente, do momento de análise e de suas interações, além do efeito aleatório dos machos doadores do sêmen. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey-Kramer (P≤0,05).

 

A motilidade espermática total não foi influenciada pela frequência de homogeneização, mas foi influenciada pela interação do diluente e do momento (Figura 1; P≤0,05), sendo superior no diluente Androstar® Plus quando comparado ao BTS, nas 72 h e 168 h de armazenamento. Já a motilidade progressiva foi menor com BTS do que Androstar ® Plus, em todos os momentos de avaliação.

 

Figura 1 Motilidade total de espermatozoides suínos ao longo do armazenamento em função do diluente e da homogeneização manual ou automática. *indica diferença significativa (P≤0,05) entre os diluentes dentro do momento. MANUAL = homogeneização manual das doses, uma vez ao dia; AUTO = agitação mecânica e automatizada das doses, quatro vezes por dia, durante dois minutos.

 

A integridade de acrossoma apresentou influência do diluente e do momento, mas o efeito do grupo de homogeneização não foi observado para essa variável (Tabela 1).

 

Tabela 1 – Integridade de acrossoma de doses de sêmen de acordo com o tempo de armazenamento, diluente e forma de homogeneização. Valores expressos como Média ± Erro Padrão da Média.

Não houve diferença significativa entre as formas de homogeneização dentro do diluente e momento (P>0,05). MANUAL = homogeneização manual das doses, uma vez ao dia; AUTO = agitação mecânica e automatizada das doses, quatro vezes por dia, durante dois minutos.

 

Os dados referentes à motilidade, percentual de defeitos de acrossoma e cinética espermática não diferiram entre os grupos de homogeneização, o que contradiz os relatos de Rodríguez-Gil & Rigau (1995). Segundo esses autores, a homogeneização constante teria um efeito benéfico em comparação a DI não homogeneizadas. O fato de que a agitação das doses não afetou a qualidade espermática também está em contradição com o efeito prejudicial encontrado por Schulze et al. (2015) nas DI homogeneizadas em relação às doses sem agitação. Por outro lado, os resultados encontrados são reforçados por Simmet et al. (1998), que não observaram diferença significativa na motilidade espermática até três dias de armazenamento e no percentual de acrossomas anormais entre as DI sem homogeneização, com homogeneização uma vez ao dia e com homogeneização permanente. Dessa forma, tanto Simmet et al. (1998) quanto Schulze et al. (2015) sugerem que a prática da homogeneização de DI de sêmen suíno não se faz necessária, visto que o efeito da sedimentação não afeta de forma prejudicial a qualidade das doses.

 

Para várias variáveis (integridade de acrossoma, motilidade progressiva, BCF, DCL, DAP, VCL, VSL, VAP, ALH, STR, LIN, WOB) foi observado efeito do diluente e/ou do momento ou a interação entre ambos. O efeito do momento de armazenamento na qualidade das DI reflete as consequências do envelhecimento celular, durante o qual ocorrem mudanças funcionais e estruturais nos espermatozoides mesmo com a ação do diluente, afetando a qualidade da DI (WABERSKI et al., 1994). A superioridade do diluente de longa ação Androstar® Plus na manutenção prolongada da qualidade espermática em comparação ao diluente de curta ação BTS já era esperada, uma vez que a função do diluente é permitir a viabilidade espermática durante um determinado período, que varia de acordo com o diluente (JOHNSON et al., 2000). O efeito dos diluentes observado nesse estudo pode ser atribuído aos componentes adicionais dos diluentes de ação prolongada, que asseguram melhor controle de pH e proteção de membranas (AMBROGI et al., 2006).

 

O aumento da frequência de agitação na conservadora com agitação automática não influenciou a qualidade espermática das doses inseminantes. Não há necessidade de homogeneização diferenciada das doses de sêmen de acordo com o diluente utilizado.

 

1. AMBROGI DE, M.; BALLESTER, J.; SARAVIA, F.; et al. 2006. Effect of storage in short- and longterm commercial semen extenders on the motility, plasma membrane and chromatin integrity of boar spermatozoa. International Journal of Andrology, (29): 543–552.

2. BELSTRA, B., 2007. On-farm semen receiving, storage and use for a successful AI program. Proceedings of the North Carolina Healthy Hogs Seminar. 9 p.

3. JOHNSON, L.A.; WEITZE, K.F.; FISER, P.; et al., 2000. Storage of boar semen. Animal reproduction science, (62): 143–172.

4. RODRÍGUEZ-GIL, J.E.; RIGAU, T., 1995. Effects of slight agitation on the quality of refrigerated boar sperm. Animal Reproduction Science, (39): 141-146.

5. SIMMET, C.; RATH, D.; LORTON, S., 1998. Dose sedimentation of liquid boar semen influence semen quality during storage? Proceedings of the 15th IPVS Congress, (3): 62.

6. SCHULZE, M.; KÜDIGER, K.; WABERSKI, D., 2015. Rotation of boar semen doses during storage affects sperm quality. Reproduction in Domestic Animals. Doi: 10.1111/rda.12532

7. WABERSKI, D. WEITZE, K. F.; LIETMANN, C.; et al., 1994. The initial fertilizing capacity of longterm stored liquid boar semen following pre-and postovulatory insemination. Theriogenology, (41): 1367–1377.