PERFIL DE SUSCEPTIBILIDADE DE Leptospira interrogans SOROVAR POMONA ISOLADA DE SUÍNOS

 

Leptospirose é uma doença infecciosa considerada importante por ser zoonose disseminada mundialmente, além de ser reemergente em alguns países desenvueltos (EVANGELISTA et al, 2010). A infecção de suínos por Leptospira interrogans gera considerável perda econômica á indústria produtora de suínos e risco à saúde humana (RAMOS et al, 2006). Os sorovares descritos prevalentes no Brasil são Pomona, Icterohaemorrhagie e Tarassovi. A infecção pelo sorovar Pomona é caracterizada por altos títulos de anticorpos, sinais clínicos variáveis e estado de portador renal (BOLIN, 1994). A importância de estudos em susceptibilidade de Leptospira está no avanço do tratamento da leptospirose e controle da doença em granjas, com o intuito de reduzir perdas econômicas, por exemplo, aborto de leitões. Apesar do estudo em questão envolver um número menor de isolados de campo, considera-se importante o levantamento de dados relativos à variabilidade da sensibilidade antimicrobiana de L. interrogans Sorovar Pomona, uma vez que são poucas as publicações destes dados. Embora o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) ainda não tenha estabelecido as diretrizes padronizando o antibiograma de Leptospira, os estudos de susceptibilidade são desenvolvidos para melhorar tratamentos de leptospirose, além de fornecer importantes dados epidemiológicos para o estudo da doença no mundo (CHAKBORTY et al, 2010). O objetivo deste estudo foi determinar um perfil de susceptibilidade de L. interrogans sorovar Pomona isolados de suínos através da determinação da concentração inibitória mínima contra os principais agentes antimicrobianos utilizados em suinocultura

 

Foram isoladas nove estirpes de L. interrogans Sorovar Pomona de suínos infectados e aparentemente saudáveis dos estados de Minas Gerais e São Paulo, sendo sete desses isolados provenientes de rim e dois de material de aborto. Estas amostras foram cedidas pelo Laboratório de Zoonoses Bacterianas da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia – USP. Os isolados foram cultivados a 30°C por sete dias e diluídos até uma densidade ótica, a 420 nm, de 0,32 (aproximadamente 108 UFC/ml). Em seguida, foi realizada diluição seriada em meio de cultura EMJH para alcançar a concentração final de, aproximadamente, 2 x 106 UFC /ml. O inóculo também foi confirmado por contagem em câmara de Petroff-Hausser em microscopia de campo escuro. A microdiluição em caldo foi realizada de acordo com o protocolo de Murray e Hospenthal (2004), adaptado para o uso do produto BOPO6F ?Standard Susceptibility MIC Plates? da linha SENSITITRE® (TREK Diagnostic Systems/ Thermo Fisher Scientific). Foram adicionados 50 μL do inóculo em cada poço da Sensititre® MIC Plate e incubadas por três dias a 30°C.

 

Os valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) estão presentes na Tabela 1. As estirpes GR5, GR6, KR9, KF10 e KR11 foram descritas por Miraglia et al., (2008). As estirpes 13 A e LPF são estirpes de referência, utilizadas como controle. Todos os isolados obtiveram altos valores de CIM frente à tiamulina, gentamicina, clortetraciclina, oxitetraciclina, neomicina (>64), tilmicosina (>128), trimetoprim/sulfametoxazole (>4/72), spectiomicina e sulfadimetoxina (>512). Altos valores de CIM frente à fluorquinolona também foram observados. Todos os isolados parecem ser sensíveis a penicilina, ampicilina, ceftiofur, tilosina e tulatromicina. Observou-se CIM variável frente à florfenicol. A cepa GR5 apresentou pequena diferença no perfil de susceptibilidade devido a baixos valores de CIM frente à gentamicina, florfenicol, clortetraciclina e oxitetraciclina. Em contrapartida, apresentou resistência à clindamicina. No aspecto clínico, os resultados mais importantes são a sensibilidade da maioria das estirpes aos β–lactâmicos, que representam o tratamento mais comum para leptospirose, e o aumento dos valores de CIM para os aminoglicosídeos, tetraciclinas e macrolídeos. Estas classes de antimicrobianos são muito utilizadas na produção animal. Os resultados também chamam atenção para a susceptibilidade as fluoroquinolonas, pois a pesar de relatos anteriores de sensibilidade para esta classe e Chakraborty et al. (2010) indicarem o uso de norfloxacina como tratamento empírico alternativo para leptospirose, foram observados elevados valores de CIM para danofloxacina e enrofloxacina. Os resultados corroboram estudos prévios que apresentaram altos valores de CIM para tetraciclinas, trimetoprima/sulfametoxazole, sulfadimetoxina e cloranfenicol/florfenicol (Murray e Hospenthal, 2004; Ressner et al., 2008). No entanto, não se esperava os valores elevados de CIM para tiamulina, gentamicina, neomicina e espectinomicina. Devido ao uso veterinário destes antibióticos, esses resultados requerem atenção.

 

Estirpes de sorovar Pomona deste estudo apresentaram diferentes perfis de susceptibilidade antimicrobiana comparado a perfis anteriormente descritos para outras estirpes de L. interrogans. São necessárias mais pesquisas objetivando definir perfis de susceptibilidade de sorovar

 

FAPESP - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (procesos 2011/21502-9; 2011/18290-0 e 2013/17136-2),

 

Tabela 1 – Valores de concentração inibitória mínima de isolados de L. interrogans sorogrupo Pomona frente a antimicrobianos.

¹Sorogrupo L. interrogans sorovar Pomona; ² Sorogrupo L. interrogans sorovar Pomona cepa Kennewicki Fromm.³Os valores de CIM para neomicina (>64), tilmicosina (>128), trimetoprim/sulfametoxazole (>4/72), spectiomicina e sulfadimetoxina (>512) foram iguais para todas as estirpes e foram suprimidos da tabela.

 

1. BOLIN, C.A.; 1994. Diagnosis of leptospirosis in swine. Journal of Swine Health and Production. 2: 23-24.

2. CHAKRABORTY, A.; MIYAHARA, S.; VILLANUEVA, S.; GLORIANI NG; YOSHIDA, S.; 2010. In vitro sensitivity and resistance of 46 Leptospira strains isolated from rats in the Philippines to 14 antimicrobial agents. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 54(12):5403–5405.

4. EVANGELISTA, K. V.; COBURN, J.; 2010. Leptospira as an emerging pathogen: a review of this biology, pathogenesis and host immune responses. Future Microbiology. 5(9): 1413–25.

5. MIRAGLIA, F.; MORAIS, Z. M.; CORTEZ, A.; MELVILLE, P. A.; MARVULLO, M. F. V.; RICHTZENHAIN, L. J.; VISINTIN, J. A.; VASCONCELLOS, S. A.; 2003. Comparison of four antibiotics for inactivating leptospires in bull semen diluted in egg yolk extender and experimentally inoculated with Leptospira santarosai serovar guaricura. Brazilian Journal of Microbiology. 34(2):147-15.

6. MURRAY, C. K.; HOSPENTHAL, D. R.; 2004. Broth microdilution susceptibility testing for Leptospira spp. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48(50):1548–1552.

7. RAMOS, A. C. F.; SOUZA, G. N.; LILENBAUM, W.; 2006. Influence of leptospirosis on reproductive performance of sows in Brazil. Theriogenology. 66(4): 1021-1025.

8. RESSNER, R. A.; GRIFFITH, M. E.; BECKIUS, M.L.; PIMENTEL, G.; MILLER, R. S.; MENDE, K.; FRASER, S. L.; GALLOWAY, R. L.; HOSPENTHAL, D. R.; MURRAY, C. K.; 2008.

9.Antimicrobial susceptibilities of geographically diverse clinical human isolates of Leptospira. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 52(8):2750–2754.