A importância da compatibilidade de um probiótico com agentes anticoccidianos

A coccidiose aviária, causada por espécies do gênero Eimeria, é uma das doenças infecciosas de maior importância econômica na avicultura industrial, apesar da disponibilidade de fármacos anticoccidianos presentes no mercado (Berchieri e Macari, 2000).

O processo infeccioso é rápido, de 4 a 7 dias e caracteriza-se pela multiplicação do parasita nas células do epitélio intestinais do hospedeiro, causando danos significativos à mucosa intestinal. Essas lesões podem ocorrer em diversos segmentos do intestino, conforme a espécie que esteja ocorrendo.

Algumas medidas de manejo são utilizadas para minimizar o grau de contaminação do ambiente com esses protozoários mas não são suficientes para prevenir a infecção por esses agentes. Por isso os anticoccidianos são administrados via ração para prevenir a doença e as perdas econômicas causadas por ela.

Os anticoccidianos devem ser utilizados de forma profilática, pois antes que os sintomas ou perdas de desempenho sejam evidentes, o epitélio intestinal já terá sofrido importantes lesões. Adicionalmente, o tratamento de uma infecção em curso não interrompe totalmente o surto. Desta forma, a adição de anticoccidianos na ração de frangos de corte é uma prática comum (Allen et al., 2002; Greif et al., 2001).

De uma forma geral, probióticos são utilizados na avicultura pois podem trazer benefícios ao desempenho produtivo das aves como a melhora da conversão alimentar, redução da mortalidade, estímulo ao sistema imune e proteção do hospedeiro contra patógenos entéricos (Siragusa, 2012). Sabemos que alguns dos anticoccidianos que utilizamos na produção avícola possuem efeitos antibacterianos e com isso teriam ação também sobre os probióticos adicionados às dietas. Desta forma é fundamental a confirmação da compatibilidade dos probióticos com os agentes anticoccidianos antes de adicioná-los às rações.

Validar a compatibilidade do Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940, Ecobiol^®, com uma série de anticoccidianos comumente utilizados na avicultura, como monensina sódica, diclazuril, nicarbazina, cloridrato de robenidina, salinomicina sódica, lasalocida sódica, associação de narasina com nicarbazina, maduramicina, decoquinato e semduramicina sódica.

Para essa validação dois tipos de avaliações foram realizadas, testes in vitro e in vivo.

A compatibilidade com a monensina sódica, diclazuril e nicarbazina foram estudadas por meio do ensaio de Concentração Inibitória Mínima (MIC), teste in vitro. Nesta técnica determina-se a menor concentração de uma molécula que inibe o crescimento da bactéria em estudo. Seguimos a recomendação da Autoridade Europeia para Segurança dos Alimentos, EFSA, para a determinação da compatibilidade de um probiótico com moléculas, onde a cepa avaliada deve resistir a pelo menos quatro vezes a dose máxima de bula do fármaco em estudo.

A compatibilidade com robenidina, salinomicina, lasalocida, diclazuril, associação de narasina com nicarbazina, monensina, maduramicina, decoquinato e semduramicina foi avaliada in vivo, com a recuperação do Ecobiol^® em conteúdo cecal de aves alimentadas com as diversas moléculas administradas nas rações das aves em sua dose máxima de bula.

Ambos os ensaios, in vitro e in vivo, foram realizados de acordo com as metodologias indicadas no manual técnico de “Compatibilidade de aditivos zootécnicos microbianos com outros aditivos que apresentam atividade antimicrobiana” da EFSA-FEEDDAP.

O inóculo foi preparado a partir de colônias isoladas do Ecobiol^®, a fim de se obter uma diluição de 1,0x10⁸ UFC/ml.

Todos os anticoccidianos foram preparados de acordo com as recomendações dos fabricantes e foram feitas as diluições necessárias para o atendimento da compatibilidade do probiótico com as moléculas em estudo de acordo com a determinação da EFSA, conforme tabela 1.

A MIC foi calculada como a média de três repetições da mesma concentração de cada um dos anticoccidianos. O Ecobiol^® foi considerado compatível com a molécula quando a MIC da molécula foi quatro vezes maior que sua concentração máxima na ração.

Foram realizados dois experimentos para avaliar a compatibilidade do Ecobiol^® com anticoccidianos em frangos de corte até os 21 dias de idade. Em ambos os experimentos os anticoccidianos foram incluídos na ração na dose máxima recomendada e confirmadas por análises químicas. As dietas basais possuíam níveis usuais da indústria e sua composição base era milho, trigo e farelo de soja. O Ecobiol^® foi incluído em uma dose padrão de 1,0x10⁹ UFC/kg de ração, também confirmado por análise de recuperação de esporos viáveis. No final dos experimentos foram coletados conteúdo cecal de 18 aves por tratamento e foi realizada a contagem de B. amyloliquefaciens CECT 5940 viáveis.

No experimento in vitro houve crescimento do Ecobiol^® em todas as concentrações testadas. Portanto, os resultados indicam que o Ecobiol^® é compatível com os anticoccidianos monensina sódica, diclazuril e nicarbazina.

Nos experimentos in vivo, tanto na avaliação 1 (tabela 2) e na avaliação 2 (tabela 3), a saúde das aves e o desempenho foram considerados normais durante o estudo e não foram detectadas diferenças significativas entre os tratamentos, exceto no tratamento com maduramicina, que teve impacto negativo no peso corporal e no ganho de peso final do teste (34,7 vs. 32,1 g/d; P<0,05). Em ambos os testes a contagem de Ecobiol^® foi adequada para todos os tratamentos, diferindo em aproximadamente ± 0,5 log UFC/g digesta. No experimento 1, mesmo com diferenças estatísticas observadas, todos os tratamentos não diferiram do controle e atenderam a recuperação necessária.

Baseado em todas as avaliações realizadas foi possível concluir que o Ecobiol^® é compatível com todos os anticoccidianos comerciais testados