Cólera aviário doxiciclina colistina

Pasteurella multocida é o agente etiológico do cólera aviário. A apresentação desta enfermidade é aguda, subaguda ou crônica. A apresentação aguda ou subaguda está associada com uma alta mortalidade de até 100% das aves, enquanto que os casos crônicos estão associados a infecções locais em barbilhões, seios suborbitários, peritônio, fígados, pulmões ou ovários (Boyce et al., 2004). Esta persistência em casos crônicos deixa as aves como portadoras, causando redução da produção e diminuição da fertilidade dos ovos. A profilaxia mediante vacinação deve ser considerada nas regiões onde o cólera aviário prevalece, utilizando vacinas vivas ou inativadas (Glisson et al., 2007). No entanto, as vacinas não proporcionam  proteção completa e, frequentemente, é preciso administrar antibióticos para evitar a septicemia, com a precaução de não gerar resistência, especialmente quando estes últimos são administrados de forma prolongada (Glisson et al., 2007).

A Doxiciclina é um antibiótico do grupo das tetraciclinas. Quando se administra por via oral, experimenta uma absorção gastrointestinal muito rápida e quase completa, que varia entre 93% e 98% da dose, devido a sua elevada liposolubilidade (Goodman & Gilman, 1982), obtendo-se a concentração sanguínea máxima entre a 2ª e a 4ª hora pós-administração. Esta rápida absorção não está afetada pela ingesta simultânea de alimentos. Por outro lado, a colistina (ou Polymixina E) é uma mistura dos polipeptídeos cíclicos colistina A e B. Quando a Doxiciclina e a Colistina são aplicadas simultaneamente, ambos antibióticos são efetivos contra todas as bactérias Gram negativas, incluindo P. multocida. Investigações anteriores, realizadas in vitro, demonstraram uma sensibilidade à Doxiciclina na água de beber diante de uma infecção experimental com a linhagem X73 (linhagem de referência internacional do sorotipo 1) de P. multocida (Sellyei et al., 2009). 

O presente trabalho foi desenhado para avaliar a eficácia do produto Totalbiotic^® (Vetanco S. A., Argentina), composto por uma combinação de Colistina e Doxiciclina, diante de uma infecção experimental, com duas linhagens regionais de P. multocida isoladas de casos do cólera aviário na Argentina e em forma comparativa com a mencionada linhagem de referência internacional X73.

Aves
Frangos para grelhados, de 7 dias de vida (Cobb 500). Foi feita uma amostragem de mecônio de todas as aves para garantir que estavam livres de Salmonella spp.

Ração e água
As aves receberam água e ração balanceada ad libitum. A ração foi preparada sem o agregado de antibióticos ou anticoccidianos, livre de farinhas de origem animal ou de peixe. Além disso, estava livre de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2, ocratoxina A, toxina T-2 e zearalenona. Foram realizadas análises bacteriológicas para garantir que não continha Salmonella spp., tanto na ração como na água de beber.

Instalações
As aves foram alojadas em cubículos especiais para a descarga com patogênicos. Cada cubículo está feito de cimento com portas de vidro, com pressão positiva de ar, para evitar a possibilidade de contaminação cruzada pelo ar entre os cubículos. O ambiente conta com controle de temperatura e de luz. A água foi administrada através de bebedouros plásticos e a ração em comedouros lineares.  

Linhagens de Pasteurella multocida
Foram utilizadas duas linhagens regionais de P. multocida (1019 y 2088), isoladas de casos de cólera aviário e uma linhagem de referência internacional (X73). Previamente a estes ensaios, estas três linhagens sofreram duas passagens em pintos de 1 dia de vida, mediante inoculação por via subcutânea e posterior novo isolamento das linhagens dos fígados das aves. A seguir as linhagens que passaram por um novo isolamento foram conservadas em ampolas, contendo meio criogênico, e congeladas submergindo-as em nitrogênio líquido.

Inóculo
As ampolas com as linhagens conservadas em nitrogênio líquido foram descongeladas e as linhagens que se recuperaram foram semeadas sobre placas de ágar base Columbia, com o agregado de 7% de sangue bovino desfibrinado (ASC). As placas foram incubadas durante 18 horas a 37ºC e, de cada linhagem, se transferiu uma colônia a 10 ml de caldo cérebro coração. Este caldo foi incubado durante 18 horas a 37ºC e foi diretamente utilizado para inocular as aves numa proporção de 0,1 ml, por via subcutânea. A numeração bacteriana do caldo se realizou segundo a técnica de Miles & Misra (1938).

Administração dos antibióticos
Foi utilizado o produto comercial Totalbiotic^®: Doxiciclina (como Hiclato) 25 % e Colistina (como sulfato) 12,5 %. A administração deste produto comercial se realizou dissolvendo-o em água de beber para aplicar uma dose de Doxiciclina de 10 mg/kg de peso vivo e de Colistina de 5 mg/kg de peso vivo, o que corresponde a um total de 4 g do produto por cada 10 litros de água de beber. A administração dos antibióticos foi imediatamente posterior à inoculação.

Desenho Experimental:
Os pintos foram divididos em 6 grupos de 11 aves cada um. Para cada linhagem, houve 22 pintos divididos em 2 grupos: um grupo de 11 aves recebeu o antibiótico na água de beber, enquanto que o outro grupo de 11 aves se manteve como controle, sem a administração do antibiótico. Foi registrada a mortalidade durante 48 horas pós-inoculação (Tabela 1), e a diferença entre os grupos foram avaliadas mediante o teste de Fisher.

Tabela 1. Mortalidade por Cólera Aviária. As aves foram injetadas por via subcutânea com 0,1 ml do inóculo. Foi registrada a mortalidade até 48 horas pós-inoculação

O índice de mortalidade diminuiu significativamente nos grupos tratados com antibióticos em comparação com as aves que não receberam os antibióticos na água de beber. Nos grupos tratados, correspondentes às linhagens 1019 e X73, não se registrou mortalidade, enquanto que no grupo tratado da linhagem 2088 foram encontradas 2 aves mortas, das quais não foram isolados P. multocida.

O uso dos antibióticos em aves, diante de infecções bacterianas na avicultura é uma ferramenta muito comum e importante. Sua via de administração na água de beber é preferível para conseguir um tratamento rápido e uniforme do lote infectado (Vermeulen et al., 2002). Em casos agudos do cólera aviário contar com um antibiótico de efeito imediato para evitar a septicemia, que pode gerar um índice de mortalidade de até 100% das aves. Trabalhos anteriores têm demonstrado que a sensibilidade da maioria das linhagens de P.multocida à Doxiciclina e Colistina (Jonas et al., 2001; Shivachandra et al., 2004; Sellyei et al., 2009).. Além disso, Semjén et al. (1998)  detectaram  que a Doxicilina baixou o índice de mortalidade em frangos de corte que haviam sido infectados (por via intramuscular)  com 2 x 10³ CFU/dose da linhagem X73. Em coincidência com este autor, no presente trabalho se demonstrou a eficácia do antibiótico contra infecção causada com a mesma linhagem X73, embora com uma dose (por via subcutânea) muito mais alta (2,6 x 10⁷ CFU) e além de sua ação diante de infecções experimentais com duas linhagens regionais patogênicas de P. multocida.  

O uso de Totalbiotic^® mostrou uma ação imediata contra infecções experimentais com duas linhagens regionais patogênicas de P. multocida, obtendo-se um índice de mortalidade significativamente baixo ou nulo em comparação com aves não tratadas. Portanto, chega-se à conclusão de que, para tratar casos do cólera aviário, é apropriada a utilização de Colistina e Doxiciclina combinadas segundo as recomendações do fabricante.  

Glisson JR, Hofacre CL, Christensen JP. 2008. Pasteurellosis and Other Respiratory Bacterial Infection: Fowl Cholera, pp. 739-758. En Diseases of poultry 12^th ed, Saif YM, Fadly AM, Glisson JR, McDougald LR, Nolan LK, Swayne DE. Blackwell publishing Ames, IA, USA.

Goodman & Gilman. 1982. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. Ed. Médica Panamericana, México.

Jonas M, Morishita TY, Angrick EJ, Jahja J. 2001. Characterization of nine Pasteurella multocida isolates from avian cholera outbreaks in Indonesia. Avian Dis. 45(1):34-42.

Sellyei B, Varga Z, Szentesi-Samu K, Kaszanyitzky E, Magyar T. 2009. Antimicrobial susceptibility of Pasteurella multocida isolated from swine and poultry. Acta Vet Hung. 57:357-367.

Shivachandra SB, Kumar AA, Biswas A, Ramakrishnan MA, Singh VP, Srivastava SK. 2004. Antibiotic sensitivity patterns among Indian strains of avian Pasteurella multocida. Trop Anim Health Prod 36(8):743-750.

Smejen G, Magyar T, Laczay P. 1998. Therapeutic efficacy of doxycycline against experimental Pasteurella multocida infection in broiler chickens. Acta Vet Hung. 46:85-93.

Vermeulen B, De Backerb P, Remona JP. Drug administration to poultry. 2002. Adv Drug Deliv Rev 54:795-803.